In Knoop Spel strijden twee teams tegen elkaar in denk- en doe-spelonderdelen, aangemoedigd door de teamcaptains Marit van Bohemen en Dolores Leeuwin. De kandidaten spelen spellen op de computer. Met elk spel zijn kegels te verdienen, die in een zinderend eindspel worden ingezet. Het winnende team gaat naar huis met de Gouden Knoop Trofee. Knoop in je Zakdoek is bedoeld voor mensen met een verstandelijke beperking en iedereen die geïnteresseerd is in hun belevingswereld.